南昌某犬场有9条从外地引进的德国牧羊犬先后发病，临床表现为双相型发热，精神萎顿，眼鼻流出脓性分泌物、呕吐、腹泻、其中最严重的2只死亡，我们实验室外对2只死亡德国牧羊犬的脏器病料进行了电镜检查，CDV RT-PCR检测，CDV的分离及分离毒的动物回归试验，发现德国牧羊犬所患疾病为犬瘟热（Canine distemper,CD）。现报告如下：

    1 材料和方法

    1.1病料 某犬场2只死亡德国牧羊犬的肝、脾、肺等病料。

    1.2 电子显微镜检查 取肝、脾、肺病料少许，用PBS制成1：10乳剂，3000rpm离心20min，取上清液用200目铜网沾取，经磷钨酸染色后，进行电子显微镜观察。

    1.3 CDV RT-PCR检测 按何洪彬等报道的方法进行。

    1.4病毒分离与鉴定

    1.4.1分离 分别取肝、脾、肺病料少许，用Hank s液制成1：0悬液，经3000rpm离心30min，取上清液加恩诺沙星，4℃过夜。取MDCK细胞按常规方法传代，取处理的病料按5%的量同步接种，待细胞长满单层后传代。以后每4~5天带毒传代一次，观察细胞有无CPE变化。将出现圆缩、拉网等CPE变化的肝脏分离毒（NCS）株扩大培养，并传至第9代，对其进行鉴定。

    1.4.2荧光抗体检查 在病毒传代的同时。直接在培养瓶内加入1张小玻片，3~4天后取出，按袁书智等报道的方法进行抗CDV荧光抗体染色。

    1.4.2.2电子显微镜和RT-PCR检测按上述方法进行。

    1.5动物回归试验 选抗CDV SN效价小于1：2的2~3月龄健康幼犬18只，分为3组，前2组为人工感染组，每组7只，第1组每犬滴鼻2ⅹ10TCID50，肌肉注射8ⅹ10TCID50，共1ⅹ10TCID50，第2组每犬滴鼻100倍病毒稀释液2ⅹ10TCID50，肌肉注射8ⅹ10TCID50，共1ⅹ10TCID50，第3组4只犬不接种做为健康对照，各组隔离饲养。每天观察犬的精神、食欲、体温与粪便性状，并各于接毒的第7天扑杀其中的2只作电镜检查。RT-PCR检测、CDV的分离，余者于第15天抽血作CDV SN抗体效价检测，并观察至21天。

    2 结果

    2.1电镜负染检查 在死亡德国牧羊犬的肝、脾、肺、淋巴结样品中发现了CDV样病毒粒子。

    2.2RT-PCR检测 用CDV H基因的4对特异引物从肝、脾、肺、淋巴结、肾和膀胱样品中均扩增到了相应大小的核酸片段，CDV检测结果呈阳性。

    2.3病毒分离及其鉴定 用MDCK细胞从肝脏样品中分离到了一株能够引起细胞产生拉网等 CPE变化的病毒（NCS）株，对其第9代细胞培养毒进行的电镜检查发现病毒悬液中存在CDV样病毒粒子，RT-PCR检测CDV阳性，抗CDV荧光抗体染色结果为阳性。上述结果表明从肝脏样品中分离的病毒为CDV。

    2.4动物回归试验 接种犬全部发病，接种量高的一组临床症状与发病死亡的德国牧羊犬的临床表现相同，且有1只犬死亡，而接种量低的一组症状较轻。捕杀犬的脏器病料的电镜检查。RT-PCR检测，CDV的分离及接种15天后的犬血清的抗CDV中的抗体检测均为阳性，而未接种对照犬均为阴性（数据另文待发），说明试验犬的发病及死亡是由德国牧羊犬病料中分离约CDV NCS株引起的。